板连败毒口服液的急性毒性与长期毒性试验

毒性试验是给实验动物进行不同途径和不同期限的染毒以检测各种毒性终点的试验，目的是确定无害作用水平、毒性类型、靶器官和剂量-反应关系，为安全性评价或危险性评价提供重要的资料[1]。急性毒性试验是在一日内对动物单次或多次给药，连续观察给药后动物产生的毒性反应及动物死亡情况的一种试验方法。长期毒性试验是观察连续重复给予受试兽药对动物所产生的毒性反应，首先出现的症状和严重程度，毒副反应的靶器官及恢复和发展情况，从而确定无毒反应剂量，为临床拟用安全剂量提供参考。兽用中药方剂的急性毒性与长期毒性试验近年来文献报道有所增加[2-5]。

抗病毒口服液是医学临床常用中成药，由板蓝根、连翘、石膏、知母、生地黄、石菖蒲、广藿香、郁金和芦根等9味中药组成，具有清热祛湿、凉血解毒的功能；用于风热感冒、温病发热及上呼吸道感染，也可用于流感和腮腺炎等病毒感染疾患[6]。我们的初步临床研究表明，抗病毒口服液防治宠物和畜禽风热感冒效果显著。为了将抗病毒口服液开发成为新兽药，按照《兽用中药、天然药物通用名称命名指导原则》[7]，采用主要药材名和功能结合并加剂型命名的方式确定通用名称为“板连败毒口服液”并且对其质量标准、药理毒理和临床应用等进行了系列试验研究[8-9]。本文报道板连败毒口服液的急性毒性和长期毒性试验研究结果，旨在为新兽药研发提供临床用药参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

体重为20±2 g的SPF级昆明(KM)小鼠32只，体重为200±20 g的SPF级SD大鼠96只，雌雄各半，KM小鼠和SD大鼠由广东省医学实验动物中心提供，许可证号为SCXK(粤)2013-0002。动物饲养房室内温度25±5℃，相对湿度为50%～70%，自然光照，定期消毒，大鼠和小鼠正常饮食饮水。SPF级饲料和板连败毒口服液药化饲料由广东省医学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂

谷丙转氨酶(ALT,批号)、谷草转氨酶(AST,批号)、碱性磷酸酶(ALP，批号H)和肌酐(CREAT,批号)等检测试剂盒，购自南京建成生物工程研究所；总蛋白(TP,批号Z-)、血清白蛋白(ALB,批号Z-)、总胆红素(TBI,批号A-)、直接胆红素(DBIL,批号H-)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT,批号A-)和白蛋白(ALB,批号A-)，购自北京利德曼生化股份有限公司。

1.3 主要仪器

AU 2700全自动生化分析仪，美国Backman公司产品；Sysmex XN-2000全自动血细胞分析仪，日本希森美康公司产品；尼康E200显微镜，日本NIKON公司产品；Lecia组织切片机，上海莱卡显微系统有限公司产品；KD-T生物组织烤片机，浙江省金华市科边仪器设备有限公司产品。

1.4 急性毒性试验

预试验设置高(6 000 mg/kg)、中(1 200 mg/kg)和低(240 mg/kg)剂量组，每组4只小鼠，试验前禁食不禁水12 h，试验时以0.2 mL/10 g进行一次性灌胃给药，给药后连续观察7 d，仔细观察试验动物中毒的发生和发展过程，获取中毒特点及毒性作用特征，找出4/4致死剂量和0/4致死剂量。如果高剂量组达到6 000 mg/kg的剂量，试验动物死亡率为0/4，则将动物数量增加至10只(雌、雄各半)，并且重复2次试验动物均未出现死亡，则可结束整个急性毒性试验[10]。

1.5 长期毒性试验

1.5.1 给药方案 96只SD大鼠随机分成对照组、低剂量组(8.75 g/kg)、中剂量组(17.5 g/kg)和高剂量组(35 g/kg)，每组24只、雌雄各半。大鼠采食量按照体重的10%计算，将板连败毒口服液制成所需剂量药化颗粒饲料，自由采食。

期间观察并记录各项指标，每天严格对动物房进行消毒和清洁，及时更换垫料。饲养第30天，各组随机选取16只大鼠(雌雄各半)进行采血和剖检。其余大鼠进行15 d恢复性试验，此期间各组大鼠投喂无添加药物的常规饲料，第45天进行麻醉、处死、剖检，操作同第30天。

1.5.2 观察指标 每天观察大鼠皮表、黏膜、分泌物和排泄物是否正常，同时记录大鼠的一般表现、中毒表现以及死亡情况。每7 d记录一次大鼠的饮水量、采食量和体重。

第30天和第45天均对一定数量的大鼠进行采血和剖检，检测血液学和血液生化指标，血液学指标包括：白细胞(WBC)及中性粒细胞(NE)、嗜酸性粒细胞(EO)、嗜碱性粒细胞(BA)、淋巴细胞(LY)、单核细胞(MO)的分类计数，红细胞(RBC)和血红蛋白(Hb)等；血液生化指标包括：丙氨酸氨基转移酶(谷丙转氨酶，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(谷草转氨酶，AST)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)和甘油三酯(TG)等。称取各组大鼠主要脏器(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃肠和生殖器官)的重量并计算脏器系数，对照组和高剂量组大鼠进行病理学检查。

文章来源：《临床血液学杂志》 网址: http://www.lcxyxzz.cn/qikandaodu/2021/0219/370.html